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體外生育（in vitro production；IVP）包括三大步驟：卵母細胞體外成熟（in vitro maturation）、體外受精（in vitro fertilization；IVF）和體外培養(yǎng)（in vitro culture；IVC）。運用體外系統(tǒng)產(chǎn)生胚胎，可以解決不育的問題。而動物胚胎的產(chǎn)生，可以提供胚胎干細胞、器官移植等。其中兔是許多生物醫(yī)學(xué)研究的重要模式動物。確保胚胎的發(fā)育和質(zhì)量，卵母細胞的體外成熟是最基礎(chǔ)的步驟。發(fā)育能力的降低主要在于卵母細胞的不完全成熟和多精子穿透性（polyspermic penetration）過高。因此使用化學(xué)性精制培養(yǎng)液，可以避免使用成分不明確和不穩(wěn)定的血清和卵泡液（follicle fluid；FF）。  
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO培養(yǎng)液（Reagent A） 毫升
產(chǎn)品說明書          1份
 
保存方式
 
保存在－20℃的冰箱里，有效保證6月
 
用戶自備
 
35mm細胞培養(yǎng)皿：用于樣品操作的容器
4℃微型臺式離心機：用于樣品操作
細胞培養(yǎng)箱：用于卵母細胞培養(yǎng)
 
實驗步驟
 
實驗開始前，將試劑盒里的HEPENGBIO培養(yǎng)液（Reagent A）從－20℃的冰箱里取出，置于37℃培養(yǎng)箱里均衡溫度2小時。然后進行下列操作。
 
1． 準備好新鮮切除的動物卵巢組織
2． 在30分鐘內(nèi)，從卵泡中吸出卵丘卵母細胞復(fù)合體（cumulus oocyte complexes；COC）
3． 使用卵母細胞清理液清洗3次（注意：建議使用HEPENGBIO卵母細胞清理液－HEPENGBIO14009.3）
4． 滴入xx微升HEPENGBIO培養(yǎng)液（Reagent A）到35mm細胞培養(yǎng)皿中預(yù)熱的礦物液（mineral oil）中
5． 轉(zhuǎn)移4至6個COC到培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液里
6． 放進5％CO2細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育12小時，溫度37℃，濕度飽和
7． （選擇步驟）評價卵丘擴展（cumulus expansion）和細胞成熟狀況（注意：建議使用HEPENGBIO卵母細胞核成熟苔紅素（orcein）熒光染色分析試劑盒－HEPENGBIO14025）
8． （選擇步驟）移取COC，分離卵母細胞
9． （選擇步驟）繼續(xù)后續(xù)體外受精
10． 期待結(jié)果參考：
 

	時間	卵母細胞百分率（%）
Germinal Vesicle	0至5小時	100
Metaphase I	6小時	70
Anaphase I－Telophase I	8小時	70
Metaphase II	10至12小時	80
Penetration	1天	80
Male Pronuleus Formation		60
Cleavage		86
Blastocyst	7天